蛋白标签是与目的蛋白一起融合表达的一种多肽或者蛋白，以便于目的蛋白的表达、检测、示踪和纯化等。选择合适的标签不仅有利于蛋白的可溶性表达与纯化，也可避免影响蛋白的结构功能和下游应用。本文详细介绍了几种蛋白纯化标签，帮助我们更好的设计实验。
常用标签
His标签：是由6个组氨酸（6×His）组成的短肽，组氨酸残基侧链与固态的镍有强烈的吸引力，可用于固定化金属螯合层析（IMAC），对重组蛋白进行分离纯化，His-Tag融合蛋白是目前最常用的表达方式。
His标签特点
1
分子量小，一般不影响重组蛋白的结构及生物活性；
2
标签融合蛋白纯化步骤简便，纯化条件温和，可应用于多种表达系统；
3
标签融合蛋白可在非离子型表面活性剂存在或变性条件下纯化；
4
免疫原性相对较低，His标签融合蛋白可直接用于动物免疫；
5
可和其它亲和标签一起构建双亲和标签；
6
可和其它亲和标签一起构建双亲和标签。
GST标签：为谷胱甘肽巯基转移酶蛋白，分子量大小为26KD，是一个高度可溶蛋白，可以增加外源蛋白可溶性，也可在E.coli大量表达，因此GST最适合用于原核表达。GST标签蛋白的纯化是利用GST 标签和底物谷胱甘肽(GSH)的相互作用，使用还原型的谷胱甘肽进行洗脱。
GST标签特点
1
可直接用含还原型谷胱甘肽琼脂糖凝胶亲和树脂进行纯化融合蛋白；
2
可在温和、非变性条件下洗脱，保留蛋白活性和抗原性；
3
在变性条件下会失去对谷胱甘肽树脂的结合能力，因此不能在纯化缓冲液中加入强变性剂如：盐酸胍或尿素等；
4
存在酶切位点，可用位点特异性蛋白酶去除GST标签。
FLAG标签：是由8个氨基酸组成的亲水性多肽（DYKDDDDK），六个连续的氨基酸(KDDDDK)形成了一个高度暴露的空间结构，这极大的增加了标签的亲水性和免疫原性。
His标签特点
1
亲水性高，有助于标签在蛋白质表面的正确折叠和暴露，从而便于抗体识别和结合；
2
FLAG标签中的DDDDK序列是一个典型的肠激酶切割位点，便于识别和切除；
3
由于FLAG标签的亲水性和稳定性，FLAG标签融合蛋白质可以通过非变性纯化方法进行，并通过FLAG多肽竞争抗体上连接的FLAG标签融合蛋白；
4
序列短：FLAG标签的序列简短，减少了对蛋白质功能的潜在影响，也便于基因工程操作。
HA标签：标签序列为YPYDVPDYA，源于流感病毒的红细胞凝集素表面抗原决定簇。
仅9个氨基酸，对外源靶蛋白的空间结构影响小, 容易构建成标签蛋白融合到N端或者C端。易于用Anti－HA抗体检测和ELISA检测。
HA标签特点
1
仅9个氨基酸，对外源靶蛋白的空间结构影响小, 容易构建成标签蛋白融合到N端或者C端；
2
易于用Anti－HA抗体检测，便于通过WB、ELISA等方法对融合蛋白进行检测和鉴定；
Myc标签：标签序列为EQKLISEEDL，常用于真核蛋白质重组表达标记，可应用于WB杂交、免疫沉淀IP和流式细胞术FCM中，用于检测重组蛋白在靶细胞中的表达。
Myc标签特点
1
Myc融合标签在低pH洗脱条件下可能降低蛋白质的活力，因此myc标签广泛用于检测很少用于纯化。
GFP标签：是一种约27KDa的蛋白质，能够在蓝光或紫外光的激发下发出绿色荧光。GFP标签可位于蛋白质的C端或N端，常用于真核蛋白质重组表达标记，在检测蛋白表达、蛋白和细胞荧光示踪、研究蛋白质之间相互作用和构象变化中，起到了重要的作用。
mCherry标签：单体红色荧光蛋白，分子量28 kDa，可与GFP系列共用，实现多色标记体内外实验，mCherry在N端和C端融合外源蛋白时，荧光蛋白活性和被融合的目标蛋白功能相互没有明显影响。
GFP/mCherry标签特点
1
无需破碎组织细胞、不加任何底物，可直接在荧光显微镜下观察活细胞荧光，实时显示目的基因表达情况，且荧光性质稳定；
2
标签蛋白的检测不受细胞内其他产物的影响，操作简便、快速；
3
自发荧光，无需抗体或原位杂交技术就可推知细胞中目的蛋白定位。
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