传统的免疫沉淀试剂盒在Western Blot(WB)检测中,一抗的轻链和重链可能成为重要的干扰因素,这主要是因为在免疫沉淀(IP)实验后的WB验证环节中,使用常规的Anti-IgG(H+L)酶标二抗时,会出现对应免疫沉淀一抗变性后产生的重链(约50kDa)和轻链(约25kDa)的非特异性条带。如果检测的目的蛋白分子量在这个区域附近,这些重链和轻链的条带就会与目的蛋白的信号重叠,导致检测结果的模糊不清,影响实验的准确性和可重复性。
为了避免这种干扰,可以采取一些策略,例如选择不同种属来源的一抗分别进行IP和WB实验,然后再选择无种属交叉反应的二抗进行WB实验,但在很多情况下,尤其是对创新指标的研究很难找到不同种属的一抗。因此从二抗下手反而更容易实现对轻重链影响的消除,为此康拓抗体特别推出了轻链特异性和重链特异性免疫沉淀试剂盒,可以分别避开抗体重链和轻链,该试剂盒只能检测到抗体轻重链中的一条,可以避开对目的条带的影响。
我们的试剂盒提供了专门设计的二抗,这些二抗不会与IgG的轻链或重链分子结合,只识别IgG分子的特定部分,当目的蛋白预测在25kda附近时,这时采用重链特异性试剂盒,便不会识别一抗的轻链(25kda),反之当目的蛋白条带预测在55kda附近时,使用轻链特异性免疫沉淀试剂盒,就不会出现55kda的重链条带。
除此之外,康拓抗体还能根据客户的需求,定制免疫沉淀试剂盒,可以将客户提供的一抗直接偶联磁珠或者琼脂糖凝胶,极大的提高免疫沉淀特异性和实验效率。同时也可以为客户进行微量抗体直标荧光或者HRP,直标抗体将不再需要使用二抗,因此也不存在抗体轻重链的影响,有需要的客户可以直接联系我们标记。